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阿膠的薄層鑒別與《中國藥典》權(quán)威性商討
來源: 網(wǎng)絡(luò) 類別:行業(yè)動態(tài) 更新時(shí)間:2010-06-24 閱讀次
阿膠系馬科動物驢Equus asinus L.的皮,經(jīng)煎煮、濃縮而成的干燥膠塊,味甘、性平、入肺、肝、腎經(jīng),有滋陰補(bǔ)血、潤肺止血、安胎等作用,用于治療血虛萎黃、眩暈心悸、肌萎無力、心煩不眠、虛風(fēng)內(nèi)動、肺燥咳嗽、咯血吐血、尿血便血、崩漏、婦女月經(jīng)不調(diào)、妊娠胎漏等癥。阿膠主含骨原膠,水解后得到蛋白質(zhì)、氨基酸,具有滋陰補(bǔ)血功效。作為常用藥,阿膠自1963年收載于《中華人民共和國藥典》以來,至今各版藥典均在收錄中,且質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不斷完善提高,特別是在最新版本《中國藥典》2005版(Ⅰ部)藥典的標(biāo)準(zhǔn)中,增加了薄層色譜鑒別項(xiàng),預(yù)示著阿膠的生產(chǎn)正走上標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展的道路。然而《中國藥典》2005版(Ⅰ部)130頁阿膠項(xiàng)下收錄的薄層鑒別方法,在實(shí)際操作中存在一定困難。筆者經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)操作比較,體會較深,F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)及結(jié)果報(bào)告如下,供制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)部門參考,并就阿膠的薄層鑒別方法與有關(guān)權(quán)威部門商討。
1 器材與方法
1.1 器材阿膠(東阿阿膠);硅膠(青島海洋化工廠);甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)品(編號:7352002 中國藥品生物制品鑒定所);化學(xué)試劑均為分析純。
1.2 方法
1.2.1 取阿膠粗粉0.2 g置具塞試管中,加6 mol/L鹽酸溶液8 ml,密塞,置105℃烘箱中加熱6 h,加水6 ml,搖勻,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?0 ml使溶解,作為供試品溶液。另取甘氨酸對照品,加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液,作為對照品溶液。照《中國藥典》2005版(附錄VI B)薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述供試品溶液2 μl,對照品溶液1 μl,分別點(diǎn)樣于同一硅膠薄層板上,分別以(藥典方法)苯酚∶硼砂水(4∶1)、(經(jīng)典方法)正丁醇∶冰醋酸∶乙醇∶水(4∶1∶1∶2)作為展開劑層析展開,取出、晾干,0.2%茚三酮乙醇液噴霧,105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。
1.2.2 環(huán)境條件室溫5℃,濕度85%~90%。
2 操作情況對比
2.1 展開劑的配制《中國藥典》方法:苯酚呈固體狀態(tài),加熱取用也很不方便,加之硼砂不溶于苯酚中,故該展開系統(tǒng)在配制時(shí)就較為困難;經(jīng)典方法:正丁醇、冰醋酸、乙醇、水在4∶1∶1∶2的比例下互溶,即配即用。
2.2 薄層層析展開所需時(shí)間《中國藥典》方法:7.5~8.0 h;經(jīng)典方法:4.0~4.5 h。硅膠板10×20 cm,層析展開12 cm。
2.3 層析板晾干所需時(shí)間常溫下,《中國藥典》方法:70~80 min;經(jīng)典方法:30~40 min;100℃下烘拷:《中國藥典》方法: 30~40 min;經(jīng)典方法:10~15 min。
2.4 斑點(diǎn)效果0.2%茚三酮乙醇液噴霧,105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。兩種不同展開劑層析色譜斑點(diǎn)見圖1。
2.5 結(jié)果比較薄層實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,同樣采取80℃下烘烤5 min處理,1與3比較,1層析展開后顯色斑點(diǎn)效果極好,3顯色斑點(diǎn)效果較差,有明顯的拖尾現(xiàn)象;未采取加熱處理的2與4比較,層析效果整體較差,而4拖尾現(xiàn)象明顯,2層析效果明顯好于4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,經(jīng)典方法明顯好于《中國藥典》2005年(Ⅰ部)收錄的方法。
1~2.展開劑:正丁醇∶冰醋酸∶乙醇∶水(4∶1∶1∶2)3~4.展開劑:苯酚∶0.5%硼砂(4∶1)
1、3.點(diǎn)樣前、點(diǎn)樣后硅膠板均在80℃下烘烤5 min;2、4.點(diǎn)樣前、點(diǎn)樣后硅膠板未作任何處理
3 討論
阿膠藥用始見于馬王堆漢墓出土的古醫(yī)著“五十二病方”!渡褶r(nóng)本草經(jīng)》將其列為上品,以后歷代本草均有論述,明《本草綱目》記載描述最為詳盡。隨著阿膠臨床應(yīng)用研究的深入及應(yīng)用范圍的不斷擴(kuò)大,特別是在社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展的今天,人們更注重防治“未病”,阿膠的治療作用和保健作用并重,深受中醫(yī)藥界和人們的信賴。因此,阿膠藥用的需求量一直在不斷地增加。目前,全國有50多個(gè)阿膠生產(chǎn)廠家,遍及全國各地山東、河北、河南、北京、吉林、湖南、安徽、黑龍江、甘肅、內(nèi)蒙、等省市。因此,制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)十分必要。而在制定標(biāo)準(zhǔn)時(shí),更應(yīng)該注重實(shí)用性和實(shí)效性,為企業(yè)提供方便、快捷有效的方法。按照《中國藥典》2005年版Ⅰ部收錄的鑒別項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)方法操作,供試品的制備方法可行實(shí)用,茚三酮顯色科學(xué)靈敏,唯展開系統(tǒng)苯酚:0.5%硼砂水(4∶1)的可行性和重現(xiàn)性較差,在實(shí)際的操作中有一定困難。試驗(yàn)結(jié)果表明,以苯酚∶0.5%硼砂水(4∶1)作為薄層色譜的展開系統(tǒng),不僅溶劑的配制有困難,層析展開所需時(shí)間及晾干時(shí)間長,費(fèi)時(shí)費(fèi)工,而且斑點(diǎn)擴(kuò)散,無形沒狀,多次實(shí)驗(yàn)無重復(fù)性,層析結(jié)果很不穩(wěn)定。筆者認(rèn)為,藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),作為藥品生產(chǎn)、供應(yīng)和檢驗(yàn)使用的依據(jù),其方法的選擇,應(yīng)該在專屬的基礎(chǔ)上,盡可能提供方便、實(shí)用、靈敏,可行性和重現(xiàn)性較強(qiáng)的方法。正丁醇∶冰醋酸∶乙醇∶水(4∶1∶1∶2)作為展開系統(tǒng),原本就是氨基酸的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)條件,多少年來一直沿用于藥學(xué)實(shí)驗(yàn)。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)對比顯示,經(jīng)典的氨基酸薄層層析展開系統(tǒng),同樣適合阿膠的薄層色譜檢別,以正丁醇∶冰醋酸∶乙醇∶水(4∶1∶1∶2)作為展開系統(tǒng),較之《中國藥典》阿膠收錄的展開系統(tǒng)(苯酚∶硼砂水4∶1)具有配制方便、薄層展開時(shí)間較短、晾干較快,省工省時(shí),而且顯色斑點(diǎn)集中,形狀良好,每次層析實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本相同,具有專屬、方便、實(shí)用、靈敏,重現(xiàn)性良好,具有較強(qiáng)的可行性和實(shí)用性。
1 器材與方法
1.1 器材阿膠(東阿阿膠);硅膠(青島海洋化工廠);甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)品(編號:7352002 中國藥品生物制品鑒定所);化學(xué)試劑均為分析純。
1.2 方法
1.2.1 取阿膠粗粉0.2 g置具塞試管中,加6 mol/L鹽酸溶液8 ml,密塞,置105℃烘箱中加熱6 h,加水6 ml,搖勻,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?0 ml使溶解,作為供試品溶液。另取甘氨酸對照品,加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液,作為對照品溶液。照《中國藥典》2005版(附錄VI B)薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述供試品溶液2 μl,對照品溶液1 μl,分別點(diǎn)樣于同一硅膠薄層板上,分別以(藥典方法)苯酚∶硼砂水(4∶1)、(經(jīng)典方法)正丁醇∶冰醋酸∶乙醇∶水(4∶1∶1∶2)作為展開劑層析展開,取出、晾干,0.2%茚三酮乙醇液噴霧,105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。
1.2.2 環(huán)境條件室溫5℃,濕度85%~90%。
2 操作情況對比
2.1 展開劑的配制《中國藥典》方法:苯酚呈固體狀態(tài),加熱取用也很不方便,加之硼砂不溶于苯酚中,故該展開系統(tǒng)在配制時(shí)就較為困難;經(jīng)典方法:正丁醇、冰醋酸、乙醇、水在4∶1∶1∶2的比例下互溶,即配即用。
2.2 薄層層析展開所需時(shí)間《中國藥典》方法:7.5~8.0 h;經(jīng)典方法:4.0~4.5 h。硅膠板10×20 cm,層析展開12 cm。
2.3 層析板晾干所需時(shí)間常溫下,《中國藥典》方法:70~80 min;經(jīng)典方法:30~40 min;100℃下烘拷:《中國藥典》方法: 30~40 min;經(jīng)典方法:10~15 min。
2.4 斑點(diǎn)效果0.2%茚三酮乙醇液噴霧,105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。兩種不同展開劑層析色譜斑點(diǎn)見圖1。
2.5 結(jié)果比較薄層實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,同樣采取80℃下烘烤5 min處理,1與3比較,1層析展開后顯色斑點(diǎn)效果極好,3顯色斑點(diǎn)效果較差,有明顯的拖尾現(xiàn)象;未采取加熱處理的2與4比較,層析效果整體較差,而4拖尾現(xiàn)象明顯,2層析效果明顯好于4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,經(jīng)典方法明顯好于《中國藥典》2005年(Ⅰ部)收錄的方法。
1~2.展開劑:正丁醇∶冰醋酸∶乙醇∶水(4∶1∶1∶2)3~4.展開劑:苯酚∶0.5%硼砂(4∶1)
1、3.點(diǎn)樣前、點(diǎn)樣后硅膠板均在80℃下烘烤5 min;2、4.點(diǎn)樣前、點(diǎn)樣后硅膠板未作任何處理
3 討論
阿膠藥用始見于馬王堆漢墓出土的古醫(yī)著“五十二病方”!渡褶r(nóng)本草經(jīng)》將其列為上品,以后歷代本草均有論述,明《本草綱目》記載描述最為詳盡。隨著阿膠臨床應(yīng)用研究的深入及應(yīng)用范圍的不斷擴(kuò)大,特別是在社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展的今天,人們更注重防治“未病”,阿膠的治療作用和保健作用并重,深受中醫(yī)藥界和人們的信賴。因此,阿膠藥用的需求量一直在不斷地增加。目前,全國有50多個(gè)阿膠生產(chǎn)廠家,遍及全國各地山東、河北、河南、北京、吉林、湖南、安徽、黑龍江、甘肅、內(nèi)蒙、等省市。因此,制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)十分必要。而在制定標(biāo)準(zhǔn)時(shí),更應(yīng)該注重實(shí)用性和實(shí)效性,為企業(yè)提供方便、快捷有效的方法。按照《中國藥典》2005年版Ⅰ部收錄的鑒別項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)方法操作,供試品的制備方法可行實(shí)用,茚三酮顯色科學(xué)靈敏,唯展開系統(tǒng)苯酚:0.5%硼砂水(4∶1)的可行性和重現(xiàn)性較差,在實(shí)際的操作中有一定困難。試驗(yàn)結(jié)果表明,以苯酚∶0.5%硼砂水(4∶1)作為薄層色譜的展開系統(tǒng),不僅溶劑的配制有困難,層析展開所需時(shí)間及晾干時(shí)間長,費(fèi)時(shí)費(fèi)工,而且斑點(diǎn)擴(kuò)散,無形沒狀,多次實(shí)驗(yàn)無重復(fù)性,層析結(jié)果很不穩(wěn)定。筆者認(rèn)為,藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),作為藥品生產(chǎn)、供應(yīng)和檢驗(yàn)使用的依據(jù),其方法的選擇,應(yīng)該在專屬的基礎(chǔ)上,盡可能提供方便、實(shí)用、靈敏,可行性和重現(xiàn)性較強(qiáng)的方法。正丁醇∶冰醋酸∶乙醇∶水(4∶1∶1∶2)作為展開系統(tǒng),原本就是氨基酸的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)條件,多少年來一直沿用于藥學(xué)實(shí)驗(yàn)。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)對比顯示,經(jīng)典的氨基酸薄層層析展開系統(tǒng),同樣適合阿膠的薄層色譜檢別,以正丁醇∶冰醋酸∶乙醇∶水(4∶1∶1∶2)作為展開系統(tǒng),較之《中國藥典》阿膠收錄的展開系統(tǒng)(苯酚∶硼砂水4∶1)具有配制方便、薄層展開時(shí)間較短、晾干較快,省工省時(shí),而且顯色斑點(diǎn)集中,形狀良好,每次層析實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本相同,具有專屬、方便、實(shí)用、靈敏,重現(xiàn)性良好,具有較強(qiáng)的可行性和實(shí)用性。
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