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荷葉葉綠素如何提取以及測定
荷葉葉綠素如何提取以及測定
荷葉又名蓮葉、藕葉,為睡蓮科蓮屬多年生大型水生草本植物蓮藕的葉片。蓮藕作為生長條件要求不高的水生蔬菜,在我國南北方都有分布,主要分布于長江流域和南方各省。已有研究表明,荷葉營養(yǎng)豐富,除含有普通植物所共有的碳水化合物、脂類、蛋白質(zhì)、丹寧等常規(guī)化學(xué)成分外,還富含黃酮類化合物和生物堿。葉綠素作為一種天然色素廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品等行業(yè),隨著人們生活水平的提高,對天然色素的需求量也日趨增長。而葉綠素測定主要通過葉綠素測量儀進行測量。
本文主要從荷葉葉綠素的提取以及測定來分析。其中荷葉的葉綠素提取過程為:荷葉→洗凈→吸干表面水分→剪碎→稱量→研磨→浸提→離心→測吸光度值。提取具體操作為:浸提溶劑的選擇。稱取荷葉5g,以乙醚、乙醇、甲酰胺、甲醇、丙酮、氯仿、二甲基亞砜7種溶劑為提取劑,料液比1∶50,于常溫條件下分別浸提1d,收集提取液定容后,于波長652nm處測吸光度值,結(jié)果可以看出,除了氯仿外,其余提取劑對荷葉葉綠素的提取率都較高,最高的是丙酮。故試驗采用丙酮作為提取溶劑。2.提取劑濃度的選擇。稱取荷葉5g,分別以65%、75%、80%、85%、90%、95%丙酮和無水丙酮為提取劑,料液比1∶10,于50℃加熱回流提取1.5h。定容后,于波長652nm處測吸光度值,結(jié)果可以看出,丙酮濃度為80%~90%時,提取效果都較好。3.料液比的選擇。稱取荷葉5g,以85%丙酮為提取劑,料液比分別為1∶5、1∶6、1∶7、1∶8、1∶9,于50℃加熱回流提取1.5h,于波長652nm處測吸光度值,結(jié)果可以看出,料液比為1∶7時,提取效果明顯優(yōu)于其他情況。4.提取溫度的選擇。稱取荷葉5g,以選定的溶劑、料液比,分別在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃加熱回流提取1.5h,提取液定容后,于波長652nm處測吸光度值,結(jié)果可以看出,低溫段葉綠素的提取效果都較好,30℃~40℃時提取液吸光度值明顯增大,40℃~60℃時恒定,但當(dāng)溫度超過60℃以后,提取液吸光度值開始下降,可能和葉綠素本身的熱穩(wěn)定性有關(guān)。選定50℃作為進一步研究的溫度條件。5.提取時間的選擇。稱取荷葉5g,以選定的溶劑、料液比,在50℃分別浸提0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h,提取液定容后,于波長652 nm處測吸光度值,結(jié)果可以看出,提取時間為1.5h時,提取效果最好。
通過對荷葉葉綠素提取條件的研究,得出荷葉葉綠素提取的優(yōu)化工藝是以85%丙酮為提取劑,料液比1∶8,提取溫度50℃,提取時間1.5h。優(yōu)化工藝下荷葉葉綠素吸光度值為2.249。將葉綠素提取完后,我們就可以進行葉綠素含量的測定,其中測定有化學(xué)方法和比較簡單的儀器法,F(xiàn)在一般如果不是精確要求,我們一般都使用葉綠素測量儀進行測定,因為葉綠素測量儀快速、方便,能夠在2秒鐘內(nèi)顯示出葉綠素SPAD值。
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