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瘦肉精檢測方法——從現(xiàn)場快速篩查到實驗室確證

來源: 網(wǎng)絡(luò)  類別:技術(shù)文章  更新時間:2011-03-18  閱讀次
鹽酸克倫特羅(Clenbuterol)俗稱“瘦肉精”,屬于β-興奮劑,因為該藥可以提高瘦肉率,減少脂肪沉積和促進動物生長,被一些畜牧養(yǎng)殖企業(yè)作為養(yǎng)殖促進劑非法使用。人食用了飼喂克倫特羅作為添加劑的動物所產(chǎn)生的畜產(chǎn)品后,殘留的克倫特羅可導(dǎo)致人體肌肉震顫、心悸、神經(jīng)過敏、頭痛、目眩、惡心、嘔吐、發(fā)燒、戰(zhàn)栗等癥狀,對消費者的健康造成極大危害。因此世界許多國家現(xiàn)已被明令禁止在飼料中添加克倫特羅來增加動物的瘦肉率。

  我國農(nóng)業(yè)部規(guī)定鹽酸克倫特羅在動物體內(nèi)的殘留標(biāo)準(zhǔn)為:馬、牛肌肉0.1ug/kg、 肝、腎0.5ug/kg牛奶0.05ug/kg

  1、 現(xiàn)場快速篩查產(chǎn)品

  瘦肉精(鹽酸克倫特羅)膠體金檢測卡用于定性檢測動物尿液(例如豬尿、牛尿、羊尿等)中鹽酸克倫特羅殘留,整個檢測過程只需要5-10分鐘左右,靈敏度為3ng/ml(3ppb)。快速方便,適用于屠宰場、農(nóng)貿(mào)市場、超市等現(xiàn)場快速檢測。

  訂貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 靈敏度
    膠體金檢測卡 HQ09001 鹽酸克倫特羅(尿液) 50條/盒 3ppb
HQ09001-1 鹽酸克倫特羅(組織) 50條/盒 1ppb

  2、 快速檢測產(chǎn)品

  瘦肉精(鹽酸克倫特羅)ELISA試劑盒使用酶聯(lián)免疫檢測試劑盒方法可檢測尿,肌肉,肝臟及飼料中的鹽酸克倫特羅。同時用于處理96個樣品,操作時間短于45min,靈敏度為0.025-0.1ng/m(ppb)。具有經(jīng)濟、快速等優(yōu)點。可進行定性半定量,相對于膠體金檢測卡結(jié)果更準(zhǔn)確,適用于實驗室快速檢測。

ELISA快速檢測試劑盒 訂貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 靈敏度
HE09002 鹽酸克倫特羅 96孔 0.1ppb
HE09002-1 鹽酸克倫特羅 96孔 0.05ppb
HE09002-2 鹽酸克倫特羅 96孔 0.025ppb

  3、準(zhǔn)確定性定量產(chǎn)品

  采用SPE-GC/MS或SPE-LC/MS等手段可對動物組織、尿液、肝臟、飼料、動物加工制品等中的鹽酸克倫特羅的進行準(zhǔn)確定性定量,能提供確證數(shù)據(jù)報告。適用于實驗室確證實驗或出具法律依據(jù)報告。

  

  • 固相萃取柱:Cleanert PCX 150mg/6mL(P/N:CX1506)
  • GC色譜柱:DA-5MS, 30m×0.25mm×0.25µm(P/N:1525-3002)
  • 參考配置:12位SPE真空裝置(P/N: VM12)

  檢測方法如下

  1.實驗材料

  1.1 固相萃取小柱:Cleanert PCX(150mg/6mL)P/N: CX1506

  1.2 四種β-激動劑藥物:鹽酸克侖特羅、沙丁胺醇、西馬特羅、萊克多巴胺等4種β-激動劑藥物。

  2. 試料的制備

  準(zhǔn)確稱取已絞碎的組織樣品10g,于50mL具塞離心管中。加入20mmol/L的乙酸銨緩沖溶液20mL,均質(zhì)5min。加入50uL β-鹽酸葡萄糖醛甙酶溶液,搖勻、超聲15min,于37℃酶解18h。于3000r/min離心5min,過濾上清液,收集濾液。

  3. 凈化

   依次用甲醇5mL、水5mL和30mmol/L鹽酸5mL潤洗固相萃取小柱,將上述備用液過柱,依次用水5mL、甲醇5mL淋洗,真空抽干,用4%氨化甲醇5mL洗脫PCX小柱,收集洗脫液于具塞玻璃試管中,50℃下氮氣吹干。在樣液過柱和洗脫過程中流速控制在1mL/min左右。

  4. 衍生化及檢測

  將上述盛有殘渣的具塞玻璃試管放入50℃烘箱中加熱片刻,除去水分后,加入甲苯100mL和雙三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)100mL,渦旋振蕩20s,密封玻璃塞,置于80℃恒溫烘箱中加熱1小時,冷卻后加入300mL甲苯,作為試樣溶液,供氣相色譜-質(zhì)譜分析(色譜柱:DA-5MS, 30m×0.25mm×0.25µm,P/N:1525-3002)。

  5. 結(jié)果

  5.1 回收率實驗(精密度和準(zhǔn)確度)

  將豬肝空白樣品經(jīng)過液液萃取初步處理后,分別添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液,配制1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L和100μg/L五個濃度的試樣溶液,每批次內(nèi)同一濃度做5次平行實驗,共4個批次(樣品典型回收率色譜圖見附圖)。

  豬肝中實驗結(jié)果列表如下:

添加濃度(μg/L) 回收濃度(μg/L) 平均回收值(μg/L) 平均回收率(%) 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(%)
1 0.75 0.72 72.40 5.93
0.67
0.72
0.70
0.78
2 1.62 1.63 81.30 1.23
1.66
1.60
1.61
1.64
5 4.02 4.24 84.80 4.16
4.10
4.27
4.38
4.43
10 8.24 8.45 84.45 2.81
8.35
8.77
8.62
8.25
100 90.24 9.12 91.15 2.86
87.15
91.77
92.62
93.95

  5.2重復(fù)性實驗(批間誤差實驗):

  豬肝中實驗結(jié)果列表如下:

批間 添加濃度(μg/L)
1 2 5 10 100
平均回收率% RSD% 平均回收率% RSD% 平均回收率% RSD% 平均回收率% RSD% 平均回收率% RSD%
1 72.40 5.93 81.30 3.49 84.80 6.16 84.45 3.59 91.15 2.86
2 75.37 6.12 80.47 5.37 84.74 7.55 87.46 4.68 90.05 3.86
3 70.09 7.85 80.80 6.57 83.10 8.17 83.21 5.39 89.53 4.16
4 76.73 4.90 78.50 8.35 82.90 5.11 85.95 5.72 88.27 5.93
平均值 73.65 6.20 80.25 5.95 83.88 6.75 85.27 4.84 89.75 4.20
RSD% 12.95 10.79 9.43 7.00 5.75

  附圖:豬肝中0.5μg/L、1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L和100μg/L六個濃度檢測結(jié)果總離子流圖(TIC)代表圖譜:

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