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蔬菜農(nóng)殘儀檢測技術(shù)和檢測注意事項(xiàng)
1、農(nóng)殘儀檢測原理
農(nóng)殘速測儀檢測原理是采用酶抑制法,在一定條件下。有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制膽堿酯酶的活性,其抑制率與農(nóng)藥的濃度星正相關(guān)11-21。在正常情況下,酶催化代謝產(chǎn)物水解.其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng),產(chǎn)生黃色物質(zhì),用分光光度計(jì)在410am處測定吸光度隨時(shí)間的變化值,計(jì)算出抑制率,通過抑制率的大小可以判斷樣品中是否有高劑量的有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。
2、農(nóng)殘速測方法
2.1試劑配制與保存
2.1.1緩沖液。用量筒量取500mL蒸餾水,先用少量(100一150 mL)的蒸餾水緩緩倒入放有緩沖 劑干粉的量杯中,用玻棒攪拌至完全溶解后將量筒中剩余的蒸餾水倒人量杯中充分?jǐn)嚢?搖勻),待用。
2.1.2顯色劑。用刻度吸管吸5.2 mL緩沖液注入顯色劑瓶中,蓋上蓋搖勻,置于0—5℃環(huán)境中備用,切勿冷凍。
2.1.3底物。用刻度吸管吸5.2 mL蒸餾水注入底物干粉瓶中,蓋上蓋搖勻,置于嘰5 cc環(huán)境中備用。
2.2樣液制備
取干凈的蔬菜,用天平準(zhǔn)確稱取2 g,葉菜取葉片部分,果菜橫截削下一片,葉片、瓜肉等剪成I cm2,置于100 mL小燒杯內(nèi);用吸管吸10 mL緩沖液注入小燒杯中,振蕩提取2 min左右;提取結(jié)束后靜置2—3 min,取上層清液作為樣液。
2.3儀器操作與樣品測定
2.3.1儀器預(yù)熱。接通電源,儀器自檢,自檢結(jié)束后待機(jī)預(yù)熱10 min.儀器工作穩(wěn)定后進(jìn)行測量13-71。
2.3.2對照測定。向檢測板最左排比色孔中用專用的移液槍分別加10卜L酶試劑,再用250斗L移液槍吸取250斗L緩沖液于比色孔,按上下鍵選擇“啟動振板”菜單后按“確認(rèn)”鍵啟動振板10 S,振板結(jié)束后。讓酶試劑和緩沖液混合液靜置反應(yīng)10 min,用專用的移液槍向比色孔分別加入lO斗L顯色劑和10斗L底物,立即將檢測板放入托盤,按“對照”鍵測量(反應(yīng)時(shí)間設(shè)為l min)。測試結(jié)束,按“確認(rèn)”鍵顯示對照吸光度變化值。待空白對照值的吸光度變化值在0.15加.30,才可測定樣品。否則要重新做空白測定。測量結(jié)束后儀器自動保存當(dāng)前的對照值,下一次測量樣品時(shí)就可以
2.3.3樣品測定。若已完成各通道的對照測試,將檢測板上所有比色孔作為樣品測量。用不同移液槍分別給比色孔加酶液10“L/孔,加注樣品液250斗【/孔,顯色劑lO斗L/孔。操作步驟同對照測試,最后按“樣品”鍵測量,測試結(jié)束后,顯示當(dāng)前測量的樣品抑制率結(jié)果和吸光度變化值?筛鶕(jù)需要打印被測樣品抑制率。
2.3.4測試結(jié)果的判定。測定結(jié)果以抑制率表示。根據(jù)GB/T5009.199—2003判定要求,當(dāng)樣品對酶的抑制率≥50%時(shí),表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在,樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需重復(fù)測2次以上。
3、注意事項(xiàng)
(1)定期校正調(diào)試、科學(xué)使用移液槍。選用250斗L和10斗L可調(diào)移液槍,將槍嘴先用清水沖洗再用純凈水沖洗,在電子天平上進(jìn)行吸液量校正。移液器使用時(shí),必須遵循器具專用原則:吸取酶、顯色劑、底物的移液器貼上專用標(biāo)簽,移取試劑時(shí)一一對應(yīng)使用。
(2)檢測室溫度要控制在20—25℃,否則會影響酶的活性,影響結(jié)果刪。若完成對照測量后,儀器關(guān)機(jī)重啟,則需重新測量對照。進(jìn)行對照測量時(shí),1 min后對照吸光度變化值應(yīng)在0.15以上,否則該酶試劑不能繼續(xù)使用。
(3)樣液制備過程中,浸提要充分,縮短時(shí)間對結(jié)果影響較大。酶試劑和樣品液或緩沖液的混合液靜置反應(yīng)時(shí)間為10 rain,反應(yīng)時(shí)間不同,結(jié)果不同。試劑從冰箱取出,先恢復(fù)至室溫,搖勻后再使用。酶、顯色劑和底物不能漏加或多加,否則對結(jié)果影響大。試劑使用時(shí),必須遵循只出不進(jìn)原則:從酶、顯色劑、底物試劑瓶中移取出的試劑.不得返回原試劑瓶中,以免污染原試劑151。若被測比色杯中有氣泡產(chǎn)生。應(yīng)排除。以免影響測量結(jié)果。
(4)測量結(jié)果抑制率A%為“一一”,表示測量結(jié)果無效?赡苡梢韵聨讉原因造成:試劑從冰箱取出后,未恢復(fù)到室溫進(jìn)行對照測試;對照測試時(shí)間與樣品測試時(shí)間相隔太久。導(dǎo)致光照與樣品測試溫度條件相差較大;被測樣品色素干擾較嚴(yán)重;反應(yīng)試劑取用量是否準(zhǔn)確。另外,其他非測試孔空白的孔位可能也會出現(xiàn)“~一”㈣。儀器操作時(shí),注意托盤上的孔位不能有頭發(fā)、棉絲等其他異物,如有污物或液體可用過濾紙擦干凈,以免影響光路測量。應(yīng)做好抽樣單、檢測結(jié)果等原始記錄的整理并保存好。
(5)抑制率≥50%的樣品,至少要重復(fù)檢測2次.才能確定此樣品是否合格。蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、蘑菇及番茄汁液中,含有對酶有影響的植物次生物質(zhì),容易產(chǎn)生假磷類農(nóng)藥的樣品5個,檢出率為6.3%。檢出農(nóng)藥為乙酰甲胺磷、毒死蜱、三唑磷、氧化樂果。
2.4有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留檢測結(jié)果
由表5可以看出,在被檢測的80個樣品中,檢出有機(jī)氟類農(nóng)藥的樣品3個,檢出率為3.8%。檢出農(nóng)藥為三氟氯氰菊酯、三唑酮、百菌清。
4、緒論與討論
(1)從樣品檢測添加回收率來看,添加回收率均在65%一130%之間,符合國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。
(2)有機(jī)氯類農(nóng)藥自20世紀(jì)40年代開始使剛,7忙80年代,一些國家相繼限用和禁用,我國于1983年停止生產(chǎn)樣品分析結(jié)果顯示,畢節(jié)地區(qū)特色產(chǎn)品中雖有槍出有機(jī)氯類農(nóng)藥,但根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)來看,樣品有檢出,但不超標(biāo),說明畢節(jié)地區(qū)特色農(nóng)產(chǎn)品是安全的。有機(jī)氯類農(nóng)藥,有的品種毒性較大,有一定的蓄積性,該類農(nóng)藥在該次檢測中也有檢出,如三氟氯氰菊酯、三唑酮、百菌清。故須加強(qiáng)此類農(nóng)藥使用的監(jiān)管力度。
(3)有機(jī)磷類農(nóng)藥具有高效、速效和廣譜的特點(diǎn),常用作殺蟲劑,作用主要是抑制膽酯酶活性。該次檢測樣品中
有檢出乙酰甲胺磷、毒死蜱、三唑磷、氧化樂果幾種農(nóng)藥。從檢測結(jié)果分析,此類農(nóng)藥有檢出,但殘留量遠(yuǎn)低于國家限量標(biāo)準(zhǔn),不會對畢節(jié)地區(qū)特色農(nóng)產(chǎn)品雖然衛(wèi)生指標(biāo)造成
(4)通過對畢節(jié)地區(qū)特色農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留量的檢測,對比我國食品中農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn),發(fā)現(xiàn)畢節(jié)地區(qū)特色農(nóng)產(chǎn)
品中農(nóng)藥殘留量低,污染少。但有農(nóng)藥檢出。希望有關(guān)部門加強(qiáng)監(jiān)管,加強(qiáng)合理使用農(nóng)藥的宣傳和指導(dǎo),規(guī)范農(nóng)資市場,建立健全市場準(zhǔn)入產(chǎn)地準(zhǔn)出制度。杜絕劣質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)入市場銷售。維護(hù)全區(qū)特色農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全和進(jìn)出口貿(mào)易信譽(yù)。確保廣大消費(fèi)者吃上安全放心的特色農(nóng)產(chǎn)品。
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