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水盤(pán)捕捉瓊脂培養(yǎng)法捕捉孢子操作過(guò)程

來(lái)源:  類(lèi)別:技術(shù)文章  更新時(shí)間:2013-03-08  閱讀次

  麥類(lèi)赤霉病的流行具有暴發(fā)性和間歇性,準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)是搞好防治的基礎(chǔ)。赤霉病的預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)主要從菌源、麥類(lèi)生育期、氣候三方面進(jìn)行調(diào)查和綜合分析。而菌源的調(diào)查又分地面稻樁帶菌率調(diào)查和空中孢子捕捉二類(lèi)?罩墟咦硬蹲接定量風(fēng)流孢子捕捉器風(fēng)向器捕捉法、電動(dòng)捕捉法和固定式捕捉法、水盤(pán)法等使用顯微鏡檢查孢子的方法。以上方法都很費(fèi)時(shí),且鏡檢技術(shù)難度大,往往不易查到孢子。1978年開(kāi)始,我們?cè)谑∞r(nóng)科院植保所麥病組的幫助指導(dǎo)下進(jìn)行水盤(pán)瓊脂培養(yǎng)法捕捉孢子的試驗(yàn)。通過(guò)6年的試驗(yàn),初步認(rèn)為該方法預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度高,且省工省力,簡(jiǎn)便易行,適宜于縣級(jí)以上病蟲(chóng)觀測(cè)站調(diào)查菌量作為短期預(yù)測(cè)依據(jù)使用。
  水盤(pán)捕捉瓊脂培養(yǎng)法操作過(guò)程
  (一)培養(yǎng)基的制備。將新鮮馬鈴薯(或番薯)洗凈去皮,用天平稱(chēng)取200克,切成細(xì)顆粒狀,放入鋼精鍋內(nèi),加水1000毫升,作好標(biāo)記,煮沸半小時(shí),煮中間可加少量開(kāi)水,使其總量不少于10的毫升。煮好后用4層紗布過(guò)濾,去渣,在馬鈴薯汁液內(nèi)再加瓊脂和白糖各20克,再煮沸使瓊脂全部溶化,中間加適量開(kāi)水,以制備1000毫升培養(yǎng)基。待瓊脂、自糖全部溶化后,分裝在試管或三角燒瓶中,每管裝18一20毫升左右,試管和三角燒瓶口塞上棉花,包_曰由紙,在高壓鍋或普通鍋內(nèi)蒸煮消毒后待用。
  (二)培養(yǎng)皿水盤(pán)誘苗。選擇不同類(lèi)型的6丘小麥田,每丘放水盤(pán)1只。水盤(pán)系采用經(jīng)過(guò)開(kāi)水消毒煮沸過(guò)的直徑為10厘米的培養(yǎng)皿,用特種鉛筆寫(xiě)上號(hào)碼或在底座上貼上小標(biāo)簽,用20毫升針筒注入無(wú)菌水,每個(gè)培養(yǎng)皿6一7毫升,使皿底鋪遍,于傍晚4時(shí)放到麥田誘菌臺(tái)上,次日上午8時(shí)取回。
  誘菌臺(tái)前選年用少_堆制,高度離地面80厘米左右,土堆頂上平放1塊15×15厘米的玻璃,上用3根小竹支撐一頂直徑為70厘米大笠帽作防雨罩。防雨罩高出地面130厘米。近2年改用舊毛竹上釘一木板,毛竹埋入土下50一60厘米,其它距離與上述相同。
  (三)菌落的塔養(yǎng)。取制備好的培養(yǎng)基試管經(jīng)煮溶后,放入溫水中使培養(yǎng)基慢慢冷卻,以不燙手為度。培養(yǎng)皿誘菌水中加入2滴硫酸雙氫鏈霉素(50萬(wàn)單位硫酸雙氫鏈霉素加5、毫升蒸餾水,放在眼藥水瓶中備用),搖勻,再加入冷卻(45℃左右)的培養(yǎng)基,迅速在臺(tái)板玻璃上搖平搖勻,蓋上培養(yǎng)皿蓋,倒放在26℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)3天。觀察計(jì)數(shù)玫瑰紅色茵落的數(shù)量。
  試驗(yàn)結(jié)果和討論
  根據(jù)1978一1983年6年應(yīng)用水盤(pán)瓊脂培養(yǎng)法捕捉空中孢子預(yù)測(cè)麥類(lèi)赤霉病的結(jié)果,初步得出以下結(jié)論:
  (一)水盤(pán)捕捉瓊脂培養(yǎng)法省工省力,方法較為簡(jiǎn)便,比電動(dòng)孢子捕捉器捕捉子囊孢子的方法(我站使用3年)優(yōu)越。它可根據(jù)赤霉病菌產(chǎn)生玫瑰紅色菌落的多少計(jì)數(shù),不用顯微鏡檢查,也不會(huì)漏掉捕到的孢子數(shù),消毒滅菌要求不高,即便有雜菌生長(zhǎng),也不影響檢查,因此易于普及推廣。
  (二)水盤(pán)瓊脂培養(yǎng)法用來(lái)捕捉空中孢子預(yù)測(cè)小麥赤霉病的準(zhǔn)確程度高。根據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,小麥?zhǔn)蓟ㄆ谇?0天和4月上旬平均每盤(pán)菌落數(shù)與小麥赤霉病穗發(fā)病率的相關(guān)性達(dá)極顯著和顯著水準(zhǔn),對(duì)小麥赤霉病的短期預(yù)測(cè)有明顯的作用(表1)。而用電動(dòng)孢子捕捉器捕捉,我們進(jìn)行了3年,捕到孢子極少,根本無(wú)法預(yù)測(cè);稻樁帶菌率調(diào)查進(jìn)行了7年,初步認(rèn)為稻樁帶菌率的高低與當(dāng)年大田麥類(lèi)赤霉病發(fā)生程度沒(méi)有相關(guān)性,故不能作為預(yù)測(cè)流行與否的根據(jù)。
  1. 小麥?zhǔn)蓟ㄇ?0天平均每盤(pán)菌落數(shù)與小麥赤霉病穗發(fā)病率關(guān)系,用6年資料統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果,相關(guān)性極顯著(r=0.9563關(guān)關(guān))。
  表1水盤(pán)捕捉瓊脂培養(yǎng)法誘菌量與小麥赤霉病發(fā)病程度的關(guān)系

表1水盤(pán)捕捉瓊脂培養(yǎng)法誘菌量與小麥赤霉病發(fā)病程度的關(guān)系
  以y為小麥赤霉病穗發(fā)病率(%),x1為小麥?zhǔn)蓟ㄇ?0天平均每盤(pán)菌落數(shù),其預(yù)測(cè)式為:
  y=0.09757x1一4.182±2.806
  根據(jù)該式判別小麥?zhǔn)蓟ㄇ?0天平均每盤(pán)菌落數(shù)在100個(gè)以下的,小麥赤霉病為極輕年,一般不必進(jìn)行第2次藥治;在100一250個(gè)的為輕發(fā)年,部分小麥田應(yīng)治第2次,在250個(gè)以上的為中發(fā)年,應(yīng)治第2次。所以該式可用于決定小麥?zhǔn)欠裥枰M(jìn)行第2次藥治。
  2. 4月上旬平均每盤(pán)菌落數(shù)與小麥赤霉病穗發(fā)病率關(guān)系,用6年資料統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果,相關(guān)性達(dá)顯著水準(zhǔn)(r=0.5225)。以y為小麥赤霉病穗發(fā)病率(腸),x1為4月上旬平均每盤(pán)菌落數(shù),其預(yù)測(cè)式為:
  y=0.1697x1一4.739±5.459
  我縣小麥?zhǔn)蓟ㄆ诩吹趇次防治適期在4月15日左右,·所以該式可用來(lái)短期預(yù)測(cè)小麥赤霉病的發(fā)病程度,指導(dǎo)第1次防治工作。
  3. 根據(jù)6年水盤(pán)捕捉瓊脂培養(yǎng)法的試驗(yàn)結(jié)果,其中5年孢子高峰日在小麥?zhǔn)蓟ㄇ昂,這5年小麥發(fā)病都重于大麥;而1981年情況特殊,孢子高峰日與大麥齊穗期吻合,且4月12日開(kāi)始幾乎沒(méi)有捕到孢子,所以1981年大麥穗發(fā)病率達(dá)5.7%,而小麥穗發(fā)病率僅0.78%。這對(duì)分析菌量和病害的關(guān)系很有說(shuō)服力。
  3月21日至4月20日合計(jì)平均每盤(pán)誘菌量與小麥赤霉病發(fā)病率的關(guān)系,經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析未達(dá)顯著水準(zhǔn),但相關(guān)性較好。1978一1981年4年誘菌量均在200個(gè)以下,病害發(fā)生為極輕年份;1982一1983年2年誘菌量在300個(gè)以上,病害發(fā)生為輕發(fā)到中等偏輕年份。

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