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乳制品中三聚氰胺的高效液相色譜檢測法
來源: 本站 類別:技術(shù)文章 更新時間:2010-02-22 閱讀次
三聚氰胺(Melamine)是一種重要的三嗪類含氮雜環(huán)有機化工原料,主要用于生產(chǎn)三聚氰胺-甲醛樹脂,廣泛用于木材加工、塑料、涂料、造紙、紡織、皮革等行業(yè),為白色晶體。三鹿奶粉事件引發(fā)了對三聚氰胺檢測的廣泛關(guān)注,國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局和國家標準化管理委員會相繼發(fā)布了《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》(GB/T22388-2008)和《原料乳中三聚氰胺快速檢測 液相色譜法》(GB/T22400-2008)的國家標準。本文參考了以上標準并進行配制條件優(yōu)化,建立了液相色譜檢測法,前處理簡單,檢測限、精密度、重現(xiàn)性以及回收率均符合國家標準。
1 實驗部分
1.1 儀器與試劑
高效液相色譜儀(含UV1620紫外-可見檢測器1臺,P1620高壓恒流泵1臺;AT-330色譜柱溫箱;FA2004分析天平;TGL-16G-A離心機;三聚氰胺標準品>99%;辛烷磺酸鈉(色譜純);磷酸(分析純)、乙腈(色譜純)、純凈水。
1.2 標準品溶液配制
精密稱取三聚氰胺標準品,溶于50%的甲醇水溶液,配制稱1.422mg/ml的標準儲備液,于4℃避光保存。根據(jù)實驗需要,用流動相逐級稀釋成適當濃度的標準工作液。
1.3 樣品前處理
稱取2g酸奶樣品與50ml具塞離心管中,加入乙腈:水=50:50混合溶液15ml,充分混勻后超聲提取15min。取提取液250ul,加入0.1mol/l鹽酸750ul,混勻,以12000r/min離心5min,取上清液,0.22um濾膜過濾,作為HPLC測定溶液。
1.4 色譜條件:
色譜柱:Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)
流動相:乙腈/緩沖鹽=15/85(緩沖鹽:10mM辛烷磺酸鈉水溶液,含0.1%磷酸)
流速:1.0ml/min
波長:240nm
溫度:40℃
進樣量:20μl
2 實驗結(jié)果
2.1 精密度實驗
取濃度為0.569μg/ml三聚氰胺標準工作液,按上述色譜條件,連續(xù)進樣5次,以各成分峰面積計算RSD(%),所得結(jié)果如表1所示:保留時間相對標準偏差(RSD)為0.23%,峰面積RSD為0.57%。
表1 精密度實驗
NO. |
Retention time(min) |
Peak High |
Peak Area |
1 |
11.933 |
289 |
4216.8 |
2 |
11.990 |
290 |
4264.2 |
3 |
11.928 |
287 |
4246.0 |
4 |
11.927 |
287 |
4242.8 |
5 |
11.923 |
284 |
4218.6 |
RSD(%) |
0.23 |
0.82 |
0.57 |
圖1 三聚氰胺標準品
2.2 標準曲線
配置濃度分別為0.142、0.284、0.853、1.422、7.110、14.220μg/mL的三聚氰胺標準工作液。將以上6種標準工作液在上述色譜條件下按濃度由低至高進樣。用最小二乘法以對照品濃度(橫坐標X軸,µg/ ml)對峰面積(縱坐標Y軸)進行線性回歸,求算標準曲線。
2.3 加樣回收率和重現(xiàn)性實驗
取已知三聚氰胺含量的酸奶樣品,加入一定量的標準儲備液,按“樣品前處理” 操作,平行制備3份,得到樣品溶液后按上述色譜條件進樣分析,得到加樣回收率及重現(xiàn)性結(jié)果,見表2。
表2 加樣回收率和重現(xiàn)性(n=3)
Spiked(mg/kg) |
Recovery(%) |
RSD(%) |
35.0 |
87.2 |
1.37 |
圖2 空白酸奶樣品
圖3 加標酸奶樣品
2.4 檢測限及定量限
依據(jù)噪聲值,按3倍信噪比,計算其理論檢出限,為0.221 mg/kg;按10倍信噪比,計算其定量限,為0.738 mg/kg。
3 結(jié)論
本方法優(yōu)化了高效液相色譜法檢測乳制品中三聚氰胺測定方法,該方法簡化了前處理步驟,易于操作,線性關(guān)系良好,有較好的精密度和重現(xiàn)性,回收率滿足國家標準的要求,檢出限和定量限也符合目前三聚氰胺的檢測要求。
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