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中藥材農(nóng)藥殘留檢測(cè)的主要方法
來源： 類別：技術(shù)文章 更新時(shí)間：2013-09-24 閱讀次
由于中藥材的種植者缺乏合理使用農(nóng)藥的知識(shí)，同時(shí)，農(nóng)藥市場(chǎng)充斥著很多假冒偽劣產(chǎn)品，種植者長(zhǎng)期使用高毒及高殘留農(nóng)藥，上述諸多原因造成了許多高毒及高殘留農(nóng)藥在中藥材中的殘留，這嚴(yán)重制約了我國(guó)中藥材走向國(guó)際草藥市場(chǎng)。然而，令人感到鼓舞的是國(guó)家藥品監(jiān)督管理局于2002年3月18日頒布并于6月1日施行的5中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（試行）6和國(guó)家外經(jīng)貿(mào)部于2001年7月1日實(shí)施的5藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)6必將使我國(guó)藥材生產(chǎn)有法可依，必將促進(jìn)中藥的現(xiàn)代化和國(guó)際化。
1 藥材農(nóng)藥殘留問題
中藥材的質(zhì)量直接影響中藥產(chǎn)品的質(zhì)量，衡量中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)除中藥自身的有效成分外，還包括化學(xué)農(nóng)藥及重金屬的污染。藥材農(nóng)藥殘留問題日益引起世界各國(guó)的重視，國(guó)際上從1970年起開始研究藥材農(nóng)藥殘留量問題，1980年世界衛(wèi)生組織將農(nóng)藥殘留測(cè)定單獨(dú)列為檢測(cè)項(xiàng)目，近年來成為世界性的研究熱點(diǎn)，如埃及學(xué)者分析了20種植物303個(gè)樣品中的有機(jī)氯和有機(jī)磷農(nóng)藥。自1986年起我國(guó)的科研工作者們逐步將農(nóng)殘檢測(cè)研究工作開展起來,并逐步規(guī)定了各種中藥農(nóng)藥殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)。李慶民等測(cè)定了人參中六六六農(nóng)藥含量；除了測(cè)定人參中六六六的含量外，還測(cè)定了其中滴滴涕的含量；分析了紅花等5種藥材中農(nóng)藥（六六六、DDT）的殘留量；韓桂茹等[分析了金銀花、枸杞子、大青葉、知母及潞黨參等中藥材中有機(jī)氯農(nóng)藥和有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量；建立了西洋參、黃芪及甘草中有機(jī)氯農(nóng)藥測(cè)定的氣相色譜法。用毛細(xì)管氣相色譜法分析了甘草、黃芪等中藥材中多種有機(jī)氯農(nóng)藥的含量。田金改等對(duì)中成藥中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留進(jìn)行了分析。陳建民等[對(duì)11種中藥及6種中成藥中有機(jī)氯農(nóng)藥測(cè)定的方法進(jìn)一步規(guī)范化，并據(jù)分析結(jié)果提出限量標(biāo)準(zhǔn)的建議。2000年出版的藥典上已記載了有機(jī)氯農(nóng)藥的測(cè)定方法，標(biāo)志著我國(guó)對(duì)于藥材農(nóng)藥殘留的研究已進(jìn)一步的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化。
2 中藥農(nóng)藥殘留的種類
我國(guó)中藥材生產(chǎn)中規(guī)定了可以使用的低毒農(nóng)藥種類，但由于藥材的種植者不能根據(jù)農(nóng)藥本身的物理、化學(xué)性質(zhì)對(duì)中藥材栽培植物群體的作用機(jī)制及其對(duì)生態(tài)環(huán)境的影響等因素，使用一些高毒及高殘留農(nóng)藥（有時(shí)是幾種混用），來防治藥材上的病蟲害。由此造成了一些高毒及高殘留農(nóng)藥在中藥材中的殘留。中藥材生產(chǎn)過程中禁止使用的農(nóng)藥種類見表1。
其中有機(jī)氯類殺蟲劑曾是各國(guó)殺蟲劑中使用最廣泛的一大類，由于其殘留量大，毒性大，污染性強(qiáng)，因此在農(nóng)殘研究中很受重視。藥材中有機(jī)氯農(nóng)藥的檢測(cè)，目前主要有六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）以及五氯硝基苯（PCNB）和艾氏劑（Aldrin）。而有機(jī)磷農(nóng)藥化學(xué)結(jié)構(gòu)中多有酯鍵，不穩(wěn)定，因此在藥材中殘留情況較少。
3 中藥農(nóng)藥殘留檢測(cè)的前處理方法
由于藥材種類繁多，各類藥材樣品基本組成復(fù)雜，預(yù)測(cè)定的各種農(nóng)藥組成不同，且存在農(nóng)藥的同系物、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物、代謝產(chǎn)物等的影響。藥材在生產(chǎn)、運(yùn)輸、加工過程中接觸到的重金屬等其它化學(xué)污染物也可能在藥材組織中蓄積，從而增加了藥材中農(nóng)藥殘留分析的難度。
農(nóng)藥殘留測(cè)定前要有適合于中藥材的預(yù)處理方法，將藥材轉(zhuǎn)化為可供上機(jī)測(cè)定的樣液，一般包括萃取、凈化、濃縮等預(yù)處理步驟。根據(jù)所測(cè)農(nóng)藥種類的不同，需要對(duì)藥材樣品采用不同的前處理技術(shù)。這需要廣大科研工作者積極探索，不斷改進(jìn)前處理技術(shù)，推出各類農(nóng)藥測(cè)定的最佳前處理技術(shù)，如有機(jī)氯農(nóng)藥的提取方法主要是在Steiwandter基礎(chǔ)上建立起來的磺化法。
4 中藥農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法
由于農(nóng)藥的品種繁多，各種農(nóng)藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)各異，不同的農(nóng)藥需采取不同的檢測(cè)方法，同時(shí)中藥中自身的化學(xué)成分的性質(zhì)若與農(nóng)藥相近，就會(huì)對(duì)農(nóng)藥的檢測(cè)形成干擾。中藥中農(nóng)藥的殘留量屬于痕量級(jí)，所有這些決定了中藥農(nóng)藥檢測(cè)存在著較大的難度，許多學(xué)者都致力于探索中藥中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法。許多科技型企業(yè)也研發(fā)了各種型號(hào)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀來做中藥材的農(nóng)藥殘留檢測(cè)，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道現(xiàn)有的中藥農(nóng)藥檢測(cè)的方法主要有:
4.1 氣相色譜法（GC）是農(nóng)藥殘留測(cè)定主要的分析手段，在有機(jī)氯和有機(jī)磷農(nóng)藥的分析領(lǐng)域中GC法仍占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。且由過去以填充柱為主，轉(zhuǎn)為目前以毛細(xì)管柱為主。
4.2 高效液相色譜法（HPLC）在農(nóng)殘分析的應(yīng)用越來越廣泛，適合于分析熱不穩(wěn)定和強(qiáng)極性農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物，且可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應(yīng)并與MS等聯(lián)用，易實(shí)現(xiàn)分析自動(dòng)化，同時(shí)一些新型檢測(cè)器的問世在一定程度上提高了HPLC的檢測(cè)靈敏度。其局限性在于主要用于對(duì)熱不穩(wěn)定、難揮發(fā)的離子型農(nóng)藥，現(xiàn)常用于氨基甲酸酯類化合物分析測(cè)定。
4.3 氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）GC-MS和GC-MS-MS聯(lián)用技術(shù)已經(jīng)成熟，MS已成為農(nóng)殘分析中的常用方法，由于串聯(lián)質(zhì)譜（MS-MS）可以減少干擾物的影響，提高儀器的靈敏度，隨著質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，質(zhì)譜法已成為農(nóng)藥殘留分析的有效手段，用化合物的質(zhì)譜圖鑒定組分優(yōu)于色譜的保留時(shí)間，用色譜保留時(shí)間和質(zhì)譜指紋數(shù)據(jù)對(duì)化合物進(jìn)行分析，最大限度地保證了分析的可靠性。
4.4 薄層色譜法（TLC）TLC無需特殊設(shè)備，簡(jiǎn)便易行，可同時(shí)分析多個(gè)樣品，多用于復(fù)雜混合物的分離和篩選。TLC除用特殊的顯色劑觀察斑點(diǎn)顏色和用Rf定性外，與其它技術(shù)聯(lián)用，不僅可定性，而且可對(duì)樣品中被分離的一種或多種成分進(jìn)行定量分析。
4.5 酶聯(lián)免疫吸附法（enemy linked immunosorbent asaay,ELISA）利用酶標(biāo)記抗體、抗抗體或抗原，通過抗原抗體之間發(fā)生ELISA反應(yīng)，依靠比色來確定農(nóng)藥殘留量。其方法優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，靈敏度高，快速簡(jiǎn)便，可準(zhǔn)確定性定量，適用于現(xiàn)場(chǎng)分析；缺點(diǎn)是由于制備抗體較困難，可能會(huì)出現(xiàn)假陽性或假陰性現(xiàn)象。
4.6 活體生物測(cè)定法（ABBA）發(fā)光細(xì)菌體內(nèi)的熒光素在有氧參與時(shí)，經(jīng)熒光酶的作用會(huì)產(chǎn)生熒光，但當(dāng)受到某些有毒化合物作用時(shí)發(fā)光會(huì)減弱，其減弱程度與毒物濃度呈一定的線性關(guān)系，據(jù)此可進(jìn)行定量。該法優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便快速，價(jià)廉，靈敏，適用于現(xiàn)場(chǎng)分析；缺點(diǎn)是農(nóng)藥濃度與發(fā)光強(qiáng)度的線性不夠準(zhǔn)確，只能半定量，活體生物測(cè)定法已經(jīng)被成功應(yīng)用于農(nóng)藥殘留速測(cè)儀中。
4.7 原子吸收光譜法主要用于無機(jī)鹽農(nóng)藥的檢測(cè)。
此外，中子液化分析法、分光技術(shù)、生物化學(xué)法、極譜法均可用于農(nóng)藥測(cè)定。
總之，生產(chǎn)綠色藥材需注意以下事項(xiàng)。應(yīng)加強(qiáng)5中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范6的宣傳。對(duì)藥材生產(chǎn)基地規(guī)定其選擇標(biāo)準(zhǔn)，一般選擇生地，以避免土壤經(jīng)多年種植中遺留的農(nóng)藥影響所種植藥材的質(zhì)量。規(guī)定中藥材生產(chǎn)可限制性使用的化學(xué)農(nóng)藥種類、毒性分級(jí)、施用農(nóng)藥的時(shí)間及方法、農(nóng)藥的最小有效用量及最后一次施藥距采收間隔期。
對(duì)藥材種植人員，應(yīng)加大植保知識(shí)的宣傳力度，杜絕使用高毒農(nóng)藥及假冒偽劣農(nóng)藥；教育其以生態(tài)學(xué)指導(dǎo)，充分利用抗性品種和天敵兩大優(yōu)勢(shì)，盡量減少農(nóng)藥使用量，并逐步過渡到不使用農(nóng)藥生產(chǎn)的綠色中藥材。改善中藥加工的設(shè)備和倉儲(chǔ)條件。避免中藥材在加工、倉儲(chǔ)過程中受到污染。
逐步建立各類中藥農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法、限量標(biāo)準(zhǔn)以及監(jiān)測(cè)機(jī)構(gòu)。隨著5中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（試行）6等法規(guī)的施行，相信我國(guó)藥材生產(chǎn)必將進(jìn)入有序良性發(fā)展軌道，從而使我國(guó)藥材以高品質(zhì)進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)，參與市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)。
1 藥材農(nóng)藥殘留問題
中藥材的質(zhì)量直接影響中藥產(chǎn)品的質(zhì)量，衡量中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)除中藥自身的有效成分外，還包括化學(xué)農(nóng)藥及重金屬的污染。藥材農(nóng)藥殘留問題日益引起世界各國(guó)的重視，國(guó)際上從1970年起開始研究藥材農(nóng)藥殘留量問題，1980年世界衛(wèi)生組織將農(nóng)藥殘留測(cè)定單獨(dú)列為檢測(cè)項(xiàng)目，近年來成為世界性的研究熱點(diǎn)，如埃及學(xué)者分析了20種植物303個(gè)樣品中的有機(jī)氯和有機(jī)磷農(nóng)藥。自1986年起我國(guó)的科研工作者們逐步將農(nóng)殘檢測(cè)研究工作開展起來,并逐步規(guī)定了各種中藥農(nóng)藥殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)。李慶民等測(cè)定了人參中六六六農(nóng)藥含量；除了測(cè)定人參中六六六的含量外，還測(cè)定了其中滴滴涕的含量；分析了紅花等5種藥材中農(nóng)藥（六六六、DDT）的殘留量；韓桂茹等[分析了金銀花、枸杞子、大青葉、知母及潞黨參等中藥材中有機(jī)氯農(nóng)藥和有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量；建立了西洋參、黃芪及甘草中有機(jī)氯農(nóng)藥測(cè)定的氣相色譜法。用毛細(xì)管氣相色譜法分析了甘草、黃芪等中藥材中多種有機(jī)氯農(nóng)藥的含量。田金改等對(duì)中成藥中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留進(jìn)行了分析。陳建民等[對(duì)11種中藥及6種中成藥中有機(jī)氯農(nóng)藥測(cè)定的方法進(jìn)一步規(guī)范化，并據(jù)分析結(jié)果提出限量標(biāo)準(zhǔn)的建議。2000年出版的藥典上已記載了有機(jī)氯農(nóng)藥的測(cè)定方法，標(biāo)志著我國(guó)對(duì)于藥材農(nóng)藥殘留的研究已進(jìn)一步的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化。
2 中藥農(nóng)藥殘留的種類
我國(guó)中藥材生產(chǎn)中規(guī)定了可以使用的低毒農(nóng)藥種類，但由于藥材的種植者不能根據(jù)農(nóng)藥本身的物理、化學(xué)性質(zhì)對(duì)中藥材栽培植物群體的作用機(jī)制及其對(duì)生態(tài)環(huán)境的影響等因素，使用一些高毒及高殘留農(nóng)藥（有時(shí)是幾種混用），來防治藥材上的病蟲害。由此造成了一些高毒及高殘留農(nóng)藥在中藥材中的殘留。中藥材生產(chǎn)過程中禁止使用的農(nóng)藥種類見表1。
其中有機(jī)氯類殺蟲劑曾是各國(guó)殺蟲劑中使用最廣泛的一大類，由于其殘留量大，毒性大，污染性強(qiáng)，因此在農(nóng)殘研究中很受重視。藥材中有機(jī)氯農(nóng)藥的檢測(cè)，目前主要有六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）以及五氯硝基苯（PCNB）和艾氏劑（Aldrin）。而有機(jī)磷農(nóng)藥化學(xué)結(jié)構(gòu)中多有酯鍵，不穩(wěn)定，因此在藥材中殘留情況較少。
3 中藥農(nóng)藥殘留檢測(cè)的前處理方法
由于藥材種類繁多，各類藥材樣品基本組成復(fù)雜，預(yù)測(cè)定的各種農(nóng)藥組成不同，且存在農(nóng)藥的同系物、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物、代謝產(chǎn)物等的影響。藥材在生產(chǎn)、運(yùn)輸、加工過程中接觸到的重金屬等其它化學(xué)污染物也可能在藥材組織中蓄積，從而增加了藥材中農(nóng)藥殘留分析的難度。
農(nóng)藥殘留測(cè)定前要有適合于中藥材的預(yù)處理方法，將藥材轉(zhuǎn)化為可供上機(jī)測(cè)定的樣液，一般包括萃取、凈化、濃縮等預(yù)處理步驟。根據(jù)所測(cè)農(nóng)藥種類的不同，需要對(duì)藥材樣品采用不同的前處理技術(shù)。這需要廣大科研工作者積極探索，不斷改進(jìn)前處理技術(shù)，推出各類農(nóng)藥測(cè)定的最佳前處理技術(shù)，如有機(jī)氯農(nóng)藥的提取方法主要是在Steiwandter基礎(chǔ)上建立起來的磺化法。
4 中藥農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法
由于農(nóng)藥的品種繁多，各種農(nóng)藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)各異，不同的農(nóng)藥需采取不同的檢測(cè)方法，同時(shí)中藥中自身的化學(xué)成分的性質(zhì)若與農(nóng)藥相近，就會(huì)對(duì)農(nóng)藥的檢測(cè)形成干擾。中藥中農(nóng)藥的殘留量屬于痕量級(jí)，所有這些決定了中藥農(nóng)藥檢測(cè)存在著較大的難度，許多學(xué)者都致力于探索中藥中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法。許多科技型企業(yè)也研發(fā)了各種型號(hào)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀來做中藥材的農(nóng)藥殘留檢測(cè)，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道現(xiàn)有的中藥農(nóng)藥檢測(cè)的方法主要有:
4.1 氣相色譜法（GC）是農(nóng)藥殘留測(cè)定主要的分析手段，在有機(jī)氯和有機(jī)磷農(nóng)藥的分析領(lǐng)域中GC法仍占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。且由過去以填充柱為主，轉(zhuǎn)為目前以毛細(xì)管柱為主。
4.2 高效液相色譜法（HPLC）在農(nóng)殘分析的應(yīng)用越來越廣泛，適合于分析熱不穩(wěn)定和強(qiáng)極性農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物，且可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應(yīng)并與MS等聯(lián)用，易實(shí)現(xiàn)分析自動(dòng)化，同時(shí)一些新型檢測(cè)器的問世在一定程度上提高了HPLC的檢測(cè)靈敏度。其局限性在于主要用于對(duì)熱不穩(wěn)定、難揮發(fā)的離子型農(nóng)藥，現(xiàn)常用于氨基甲酸酯類化合物分析測(cè)定。
4.3 氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）GC-MS和GC-MS-MS聯(lián)用技術(shù)已經(jīng)成熟，MS已成為農(nóng)殘分析中的常用方法，由于串聯(lián)質(zhì)譜（MS-MS）可以減少干擾物的影響，提高儀器的靈敏度，隨著質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，質(zhì)譜法已成為農(nóng)藥殘留分析的有效手段，用化合物的質(zhì)譜圖鑒定組分優(yōu)于色譜的保留時(shí)間，用色譜保留時(shí)間和質(zhì)譜指紋數(shù)據(jù)對(duì)化合物進(jìn)行分析，最大限度地保證了分析的可靠性。
4.4 薄層色譜法（TLC）TLC無需特殊設(shè)備，簡(jiǎn)便易行，可同時(shí)分析多個(gè)樣品，多用于復(fù)雜混合物的分離和篩選。TLC除用特殊的顯色劑觀察斑點(diǎn)顏色和用Rf定性外，與其它技術(shù)聯(lián)用，不僅可定性，而且可對(duì)樣品中被分離的一種或多種成分進(jìn)行定量分析。
4.5 酶聯(lián)免疫吸附法（enemy linked immunosorbent asaay,ELISA）利用酶標(biāo)記抗體、抗抗體或抗原，通過抗原抗體之間發(fā)生ELISA反應(yīng)，依靠比色來確定農(nóng)藥殘留量。其方法優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，靈敏度高，快速簡(jiǎn)便，可準(zhǔn)確定性定量，適用于現(xiàn)場(chǎng)分析；缺點(diǎn)是由于制備抗體較困難，可能會(huì)出現(xiàn)假陽性或假陰性現(xiàn)象。
4.6 活體生物測(cè)定法（ABBA）發(fā)光細(xì)菌體內(nèi)的熒光素在有氧參與時(shí)，經(jīng)熒光酶的作用會(huì)產(chǎn)生熒光，但當(dāng)受到某些有毒化合物作用時(shí)發(fā)光會(huì)減弱，其減弱程度與毒物濃度呈一定的線性關(guān)系，據(jù)此可進(jìn)行定量。該法優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便快速，價(jià)廉，靈敏，適用于現(xiàn)場(chǎng)分析；缺點(diǎn)是農(nóng)藥濃度與發(fā)光強(qiáng)度的線性不夠準(zhǔn)確，只能半定量，活體生物測(cè)定法已經(jīng)被成功應(yīng)用于農(nóng)藥殘留速測(cè)儀中。
4.7 原子吸收光譜法主要用于無機(jī)鹽農(nóng)藥的檢測(cè)。
此外，中子液化分析法、分光技術(shù)、生物化學(xué)法、極譜法均可用于農(nóng)藥測(cè)定。
總之，生產(chǎn)綠色藥材需注意以下事項(xiàng)。應(yīng)加強(qiáng)5中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范6的宣傳。對(duì)藥材生產(chǎn)基地規(guī)定其選擇標(biāo)準(zhǔn)，一般選擇生地，以避免土壤經(jīng)多年種植中遺留的農(nóng)藥影響所種植藥材的質(zhì)量。規(guī)定中藥材生產(chǎn)可限制性使用的化學(xué)農(nóng)藥種類、毒性分級(jí)、施用農(nóng)藥的時(shí)間及方法、農(nóng)藥的最小有效用量及最后一次施藥距采收間隔期。
對(duì)藥材種植人員，應(yīng)加大植保知識(shí)的宣傳力度，杜絕使用高毒農(nóng)藥及假冒偽劣農(nóng)藥；教育其以生態(tài)學(xué)指導(dǎo)，充分利用抗性品種和天敵兩大優(yōu)勢(shì)，盡量減少農(nóng)藥使用量，并逐步過渡到不使用農(nóng)藥生產(chǎn)的綠色中藥材。改善中藥加工的設(shè)備和倉儲(chǔ)條件。避免中藥材在加工、倉儲(chǔ)過程中受到污染。
逐步建立各類中藥農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法、限量標(biāo)準(zhǔn)以及監(jiān)測(cè)機(jī)構(gòu)。隨著5中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（試行）6等法規(guī)的施行，相信我國(guó)藥材生產(chǎn)必將進(jìn)入有序良性發(fā)展軌道，從而使我國(guó)藥材以高品質(zhì)進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)，參與市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)。
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